Набор геномнай ДНК магнітнай тканіны жывёл

A-1 Нізкая канцэнтрацыя клетак або віруса ў зыходнай пробе-узбагаціць канцэнтрацыю клетак або вірусаў.

А-2 Недастатковы лізіс узораў-пробы не былі старанна змешаны з буферам для лізісу. Прапануецца старанна перамяшаць з дапамогай імпульснага віхуравання 1-2 разы. - Недастатковы лізіс клетак, выкліканы зніжэннем актыўнасці пратэіназы К. - Недастатковы лізіс клетак або дэградацыя бялку з -за недастатковага часу цёплай ванны. Мяркуецца разрэзаць тканіну на невялікія кавалачкі і падоўжыць час ванны, каб выдаліць усе рэшткі ў лізаце.

А-3 Недастатковая адсорбцыя ДНК. —Не дадавалі ні этанолу, ні нізкапрацэнтнага, а не 100% этанолу да таго, як лізат перанеслі ў спінавую калонку.

A-4 Значэнне рн элюирующего буфера занадта нізкае. -Адрэгулюйце рн ад 8,0 да 8,3.

Рэшткавы этанол у элюенце.

—У элюенце ёсць рэшткавы прамыўны буфер PW. Этанол можна выдаліць, центрифугируя спінавую калонку на працягу 3-5 хвілін, а затым змясціўшы яе пры пакаёвай тэмпературы або інкубатар на 50 ℃ на 1-2 хвіліны.

A-1 Узор не свежы. —Выняцце станоўчай ДНК узору ў якасці кантролю, каб вызначыць, ці пагоршылася ДНК у пробе.

А-2 Няправільная папярэдняя апрацоўка. - Выклікана празмерным драбненнем вадкага азоту, вяртаннем вільгаці або занадта вялікай колькасцю пробы.

Папярэдняя апрацоўка павінна адрознівацца для розных узораў. Для ўзораў раслін старанна здрабніце ў вадкім азоце. Для ўзораў жывёл гомогенируют або старанна здрабняюць у вадкім азоце. Для узораў з клеткавымі сценкамі, якія цяжка разбурыць, напрыклад, бактэрый G+ і дрожджаў, прапануецца выкарыстоўваць лизоцим, литиказу або механічныя метады разбурэння клеткавых сценак.

4992201/4992202 Набор геномнай ДНК раслін прымае метад на аснове калонак, які патрабуе хлараформу для экстракцыі. Ён асабліва падыходзіць для розных узораў раслін, а таксама для сухога парашка раслін. Набор Hi-DNAsecure Plant таксама на аснове калонак, але не патрабуе экстракцыі фенолу/хлараформу, што робіць яго бяспечным і нетоксичным. Ён падыходзіць для раслін з высокім утрыманнем полісахарыдаў і поліфенолаў. 4992709/4992710 DNAquick Plant System прымае вадкасны метад. Экстракцыя фенолу/хлараформу таксама не патрэбна. Працэдура ачысткі простая і хуткая, без абмежаванняў на пачатковую колькасць пробы, таму карыстальнікі могуць гнутка рэгуляваць колькасць у адпаведнасці з патрабаваннямі эксперыменту. Вялікі памер фрагментаў гДНК можа быць атрыманы з высокім выхадам.

Геномная ДНК была вынята з розных аб'ёмаў узораў суцэльнай крыві чалавека з дапамогай набору ДНК крыві TIANamp. Вынікі наступныя. Вынікі прыводзяцца толькі ў якасці даведкі, фактычныя вынікі экстракцыі залежаць ад умоў узораў.

Выманне ДНК згустку крыві можна выканаць з дапамогай рэагентаў, прадстаўленых у гэтых двух наборах, проста змяніўшы пратакол на канкрэтную інструкцыю па экстракцыі ДНК згустку крыві. Мяккая копія пратакола экстракцыі ДНК згустку крыві можа быць выдадзена па запыце.

Суспендуюць свежы ўзор з 1 мл PBS, звычайнага фізіялагічнага раствора або буфера TE. Цалкам гамагенізуйце пробу з дапамогай гамагенізатара і збярыце асадак на дно прабіркі з дапамогай цэнтрыфугавання. Утылізуйце надосадочную вадкасць і зноў суспендуйце асадак з 200 мкл буфернага ГА. У адпаведнасці з інструкцыяй можна правесці наступную ачыстку ДНК.

Для ачысткі гДНК ў узорах плазмы, сыроваткі і вадкасці арганізма рэкамендуецца набор TIANamp Micro DNA. Для ачысткі гДНК віруса з узораў сыроваткі/плазмы рэкамендуецца набор ДНК/РНК віруса TIANamp. Для ачышчэння бактэрыяльнай гДНК з узораў сыроваткі і плазмы рэкамендуецца набор ДНК TIANamp Bacteria DNA (для станоўчых бактэрый варта ўключыць лізацым). Для узораў сліны рэкамендуецца набор ДНК Hi-Swab і набор ДНК TIANamp Bacteria DNA.

Для экстракцыі геному грыба рэкамендуецца набор DNAsecure Plant Kit або сістэма DNAquick. Для экстракцыі геному дрожджаў рэкамендуецца набор ДНК дрожджаў TIANamp (літыказу трэба рыхтаваць самастойна).