Набор для прамой ПЦР крыві

Хуткая ампліфікацыя гена -мішэні непасрэдна з выкарыстаннем крыві ў якасці шаблону без экстракцыі.

У гэтым наборы выкарыстоўваецца генна-інжынерная анты-інгібітарная ДНК-палімераза для эфектыўнай ампліфікацыі генаў з адной копіяй у геноме чалавека. Добра аптымізаваная буферная сістэма ў гэтым наборы дапамагае палімеразе моцна супрацьстаяць тармажэнню інгібітараў ПЦР, такім чынам, можа непасрэдна ампліфікаваць ДНК, выкарыстоўваючы кроў і культываваныя клеткі ў якасці шаблонаў. Гэты прадукт просты ў эксплуатацыі і не патрабуе складаных этапаў, такіх як ачыстка ДНК або папярэдняя апрацоўка пробы.
Гэты камплект пастаўляецца як 2 × MasterMix, і рэакцыю можна выканаць простым даданнем шаблону крыві і адпаведных праймераў для выяўлення. Яго можна наносіць на культурныя клеткі млекакормячых, такіх як людзі, мышы, свінні, буйную рагатую жывёлу і іншыя віды, а таксама свежую ці 4 -цалевую крыакансерваваную суцэльную кроў, антыкаагулянт (ЭДТА, цытрат, гепарын), звадкаваныя згусткі крыві і сухія плямы крыві захоўваецца на камерцыйных картах Whatman 903 і FTA Elute.

Котка. Не	Памер ўпакоўкі
4992529	20 мкл × 100 адн
4992530	20 мкл × 500 адн

Дашліце нам ліст

Дэталь прадукту

Эксперыментальны прыклад

Пытанні і адказы

Тэгі прадуктаў

Асаблівасці

■ Просты і хуткі: ПЦР -ампліфікацыя можа быць выканана непасрэдна з дапамогай крыві ў якасці шаблону, без неабходнасці стомных этапаў падрыхтоўкі пробы і экстракцыі ДНК.
■ Высокая чысціня: пропуск этапаў папярэдняй апрацоўкі ўзору і экстракцыі ДНК можа дапамагчы пазбегнуць перакрыжаванага заражэння узораў.
■ Высокая прапускная здольнасць: ідэнтыфікацыя ПЦР для буйнамаштабных узораў можа быць выканана шляхам аб'яднання набору з 96/384-лункавымі ПЛР-пласцінамі.
■ Моцная універсальнасць: Гэты камплект можа эфектыўна ўзмацняць фрагменты высокай ГХ або фрагменты са складанай другаснай структурай, а даўжыня ўзмацнення можа складаць да 5 кб.
■ Моцная стрэсаўстойлівасць: Гэты набор можна ўжываць для розных відаў і проб крыві, якія захоўваюцца рознымі спосабамі.

Прыкладанні

Прадукты ПЦР гэтага набору ўтрымліваюць "А" на 3'-канцы, які можа быць непасрэдна выкарыстаны для кланавання вектараў ТА. Гэты набор можа быць выкарыстаны для ампліфікацыі геномных фрагментаў ДНК, высокапрадукцыйнага генетычнага аналізу і аналізу генатыпіравання (напрыклад, выяўлення генаў).

Усе прадукты можна наладзіць для ODM/OEM. Для падрабязнасцей,калі ласка, націсніце Індывідуальнае абслугоўванне (ODM/OEM)

Папярэдні: Камплект ПЦР для аналізу і аналізу ДНК TIANcombi

Далей: Камплект прамой ПЦР мышынай тканіны

	Выкарыстоўваючы антыкаагуляцыю ЭДТА чалавека ў якасці матрыцы, 4 гены з розным утрыманнем ГХ былі ампліфікаваны пры дапамозе ПЦР крыві. Рэакцыйная сістэма ПЦР складала 20 мкл, а 1 мкл крыві выкарыстоўвалася ў якасці матрыцы. M: TIANGEN Маркер II; 1: Памер фрагмента 1090 б.п., змест ГХ 68,1%; 2: Памер фрагмента 1915 п.н., змест ГХ 70,4%; 3: Памер фрагмента 448 б.п., змест ГХ 74,8%; 4: Памер фрагмента 1527 б.п., змест ГХ 61,5%. Эксперыментальныя вынікі: Набор для прамой ПЦР крыві можа эфектыўна ампліфікаваць фрагменты ДНК з утрыманнем ГХ у дыяпазоне 61,5%-74,8%, што сведчыць аб яго здольнасці да ампліфікацыі фрагментаў з высокім узроўнем ГК.
	Выкарыстоўваючы антыкаагуляцыю ЭДТА чалавека ў якасці матрыцы, 5 генаў з рознай даўжынёй (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 і Hn4.0) былі ампліфікаваны з дапамогай ПЦР для крыві. Рэакцыйная сістэма ПЦР складала 20 мкл, а 1 мкл крыві выкарыстоўвалася ў якасці матрыцы. M: TIANGEN Маркер II; 1-3: 3 розных узору крыві; NTC: кіраванне без праймераў. Вынікі эксперыменту: Набор для прамой ПЦР крыві можа ампліфікаваць фрагменты даўжынёй да 4 кб, што сведчыць аб тым, што ён здольны ампліфікаваць доўгія фрагменты.
	Выкарыстоўваючы ў якасці шаблону антыкаагуляцыю з ЭДТА чалавека, набор ПЦР крыві быў выкарыстаны для ПЦР -выяўлення розных узораў крыві. Рэакцыйная сістэма ПЦР складала 20 мкл, а 1 мкл крыві выкарыстоўвалася ў якасці матрыцы. M: TIANGEN Маркер II; 1-9: нагрузачная колькасць крыві складае 0,1 мкл, 0,2 мкл, 0,3 мкл, 0,4 мкл, 1 мкл, 2 мкл, 3 мкл, 4 мкл і 5 мкл адпаведна; NTC: кіраванне без шаблону Вынікі эксперыменту: Набор для прамой ПЦР крыві мае моцную ўстойлівасць да крыві і можа ўзмацняць пробы крыві з дыяпазонам нагрузкі 0,1-5 мкл.
	У якасці шаблонаў выкарыстоўваліся пробы крыві людзей, пацукоў, курэй і іншых відаў з рознымі метадамі лячэння. Набор для прамой ПЦР крыві быў выкарыстаны для ампліфікацыі PRNP (чалавечы, 750 б.п.), актыну (пацук, 200 б.п.) і β-актыну (курыны, 1,0 кб). Рэакцыйная сістэма ПЦР складала 20 мкл, а 1 мкл крыві выкарыстоўвалася ў якасці матрыцы. M: TIANGEN Маркер II. Вынікі эксперыменту: Набор для прамой ПЦР крыві можна наносіць на шырокі спектр узораў, а прамое ПЦР -выяўленне можна праводзіць на пробах крыві розных відаў з рознымі метадамі лячэння.

Пытанне: Няма палас узмацнення

Шаблон А-1

■ Шаблон змяшчае прымешкі бялку або інгібітары Taq і г.

■ Дэнатурацыя шаблону не завершана - адпаведна павялічце тэмпературу дэнатурацыі і падоўжыце час дэнатурацыі.

■ Дэградацыя шаблону-паўторна падрыхтуйце шаблон.

Буквар А-2

■ Нізкая якасць грунтоўкі-паўторна сінтэзуйце грунтоўку.

■ Дэградацыя грунтоўкі - раздзяліце грунтоўкі з высокай канцэнтрацыяй на невялікі аб'ём для захавання. Пазбягайце шматразовага замарожвання і размарожвання або працяглага крыокансервавання пры 4 ° C.

■ Няправільная канструкцыя грунтоўкі (напрыклад, недастатковая даўжыня грунтоўкі, дымер, утвораны паміж грунтамі і г.д.)

А-3 Мг²⁺канцэнтрацыя

■ Mg²⁺ занадта нізкая канцэнтрацыя - правільна павялічвайце Mg²⁺канцэнтрацыя: Аптымізаваць Mg²⁺ канцэнтрацыі серыяй рэакцый ад 1 мМ да 3 мМ з інтэрвалам 0,5 мМ для вызначэння аптымальнага Mg²⁺ канцэнтрацыя для кожнага шаблону і грунтоўкі.

А-4 Тэмпература адпалу

■ Высокая тэмпература адпалу ўплывае на звязванне грунтоўкі і шаблону. —— Знізіць тэмпературу адпалу і аптымізаваць стан з градыентам 2 ° C.

A-5 Час падаўжэння

■ Кароткі час падаўжэння —— павялічвайце час падаўжэння.

Пытанне: ілжывы станоўчы вынік

З'явы: адмоўныя пробы таксама паказваюць паласы мэтавай паслядоўнасці.

A-1 Забруджванне ПЦР

■ Перакрыжаванае забруджванне паслядоўнасці мішэні або прадуктаў ампліфікацыі - асцярожна, каб не адмовіць піпеткай пробу, якая змяшчае паслядоўнасць мішэні, у адмоўны ўзор або выліць іх з прабіркі для цэнтрыфугі. Рэагенты або абсталяванне варта аўтаклавіраваць для ліквідацыі існуючых нуклеінавых кіслот, а наяўнасць забруджвання трэба вызначыць з дапамогай эксперыментаў з адмоўным кантролем.

■ Забруджванне рэагентаў - разрабіце рэактывы на долі і захоўвайце пры нізкай тэмпературы.

А-2 Праймr

■ Mg²⁺ занадта нізкая канцэнтрацыя - правільна павялічвайце Mg²⁺ канцэнтрацыя: Аптымізаваць Mg²⁺ канцэнтрацыі серыяй рэакцый ад 1 мМ да 3 мМ з інтэрвалам 0,5 мМ для вызначэння аптымальнага Mg²⁺ канцэнтрацыя для кожнага шаблону і грунтоўкі.

■ Няправільны дызайн грунтоўкі, і мэтавая паслядоўнасць мае гамалогію з нецэлевай паслядоўнасцю. —— Грунтоўкі для паўторнага афармлення.

Пытанне: Неспецыфічнае ўзмацненне

З'явы: паласы ампліфікацыі ПЦР не адпавядаюць чаканым памерах, вялікія ці малыя, або часам сустракаюцца як спецыфічныя паласы ампліфікацыі, так і неспецыфічныя паласы ампліфікацыі.

Буквар А-1

■ Дрэнная спецыфічнасць грунтоўкі

—— Грунтоўка для паўторнага афармлення.

■ Занадта высокая канцэнтрацыя грунтоўкі - правільна павялічвайце тэмпературу дэнатурацыі і падаўжайце час дэнатурацыі.

А-2 мг²⁺ канцэнтрацыя

■ Mg²⁺ канцэнтрацыя занадта высокая —— Правільна знізіць канцэнтрацыю Mg2+: Аптымізаваць Mg²⁺ канцэнтрацыі серыяй рэакцый ад 1 мМ да 3 мМ з інтэрвалам 0,5 мМ для вызначэння аптымальнага Mg²⁺ канцэнтрацыя для кожнага шаблону і грунтоўкі.

А-3 Тэрмастабільная палімераза

■ Празмерная колькасць ферментаў - адпаведна зніжайце колькасць ферментаў з інтэрвалам у 0,5 ЕД.

А-4 Тэмпература адпалу

■ Занадта нізкая тэмпература адпалу-адпаведным чынам павялічце тэмпературу адпалу або прымеце двухступенчаты метад адпалу

ПЦР-цыклы А-5

■ Занадта шмат цыклаў ПЦР —— Паменшыць колькасць цыклаў ПЦР.

Пытанне: Плямістыя або размазаныя паласы

Буквар А-1—— Слабая спецыфічнасць —— Перапраектуйце грунтоўку, змяніце становішча і даўжыню грунтоўкі, каб павысіць яе спецыфічнасць; або выканаць укладзеную ПЦР.

Шаблон ДНК A-2

—— Шаблон не чысты —— Ачысціце шаблон або вылучыце ДНК з дапамогай набораў для ачысткі.

А-3 Мг²⁺ канцэнтрацыя

—— Мг²⁺ канцэнтрацыя занадта высокая - правільна знізіць Mg²⁺ канцэнтрацыя: Аптымізаваць Mg²⁺ канцэнтрацыі серыяй рэакцый ад 1 мМ да 3 мМ з інтэрвалам 0,5 мМ для вызначэння аптымальнага Mg²⁺ канцэнтрацыя для кожнага шаблону і грунтоўкі.

A-4 dNTP

—— Занадта высокая канцэнтрацыя dNTP —— Адпаведна знізіце канцэнтрацыю dNTP

А-5 Тэмпература адпалу

—— Занадта нізкая тэмпература адпалу —— Адпаведна павялічце тэмпературу адпалу

Цыклы А-6

—— Занадта шмат цыклаў —— Аптымізаваць нумар цыкла

Пытанне: Колькі матричной ДНК трэба дадаць у рэакцыйную сістэму ПЦР 50 мкл?

Пытанне: Як павялічыць доўгія фрагменты?

Першы крок - выбар адпаведнай палімеразы. Звычайная палімераза Taq не можа карэктавацца з-за адсутнасці актыўнасці 3'-5 'экзануклеазы, і неадпаведнасць значна знізіць эфектыўнасць пашырэння фрагментаў. Такім чынам, звычайная Taq -палімераза не можа эфектыўна ўзмацняць фрагменты мішэні памерам больш за 5 кб. Для павышэння эфектыўнасці пашырэння і задавальнення патрэбаў узмацнення доўгіх фрагментаў варта выбраць палімеразу Taq са спецыяльнай мадыфікацыяй або іншую палімеразу высокай дакладнасці. Акрамя таго, узмацненне доўгіх фрагментаў таксама патрабуе адпаведнай карэкціроўкі дызайну грунтоўкі, часу дэнатурацыі, часу пашырэння, рН буфера і г. д. Звычайна грунтоўкі з 18-24 б.п. могуць прывесці да лепшага ўраджаю. Каб прадухіліць пашкоджанне шаблону, час дэнатурацыі пры 94 ° C трэба скараціць да 30 сек або менш за цыкл, а час павышэння тэмпературы да 94 ° C перад узмацненнем - менш за 1 мін. Больш за тое, усталяванне тэмпературы падаўжэння прыкладна на 68 ° C і праектаванне часу падаўжэння з хуткасцю 1 кб/мін можа забяспечыць эфектыўнае ўзмацненне доўгіх фрагментаў.

Пытанне: Як палепшыць вернасць ампліфікацыі ПЦР?

Частату памылак ампліфікацыі ПЦР можна знізіць, выкарыстоўваючы розныя ДНК -палімеразы з высокай дакладнасцю. Сярод усіх знойдзеных да гэтага часу ДНК -палімераз Taq фермент Pfu мае самую нізкую частату памылак і найвышэйшую дакладнасць (гл. Прыкладзеную табліцу). У дадатак да выбару ферментаў, даследчыкі могуць дадаткова знізіць хуткасць мутацыі ПЦР за кошт аптымізацыі ўмоў рэакцыі, у тым ліку аптымізацыі складу буфера, канцэнтрацыі тэрмастабільнай палімеразы і аптымізацыі колькасці цыклаў ПЦР.

Напішыце сваё паведамленне тут і адпраўце яго нам

Катэгорыі прадуктаў

Чаму выбіраюць нас

З моманту свайго заснавання наша фабрыка распрацоўвае прадукты першага сусветнага класа з захаваннем прынцыпу
якасць у першую чаргу. Наша прадукцыя заваявала выдатную рэпутацыю ў прамысловасці і каштоўную давер сярод новых і старых кліентаў.

ЗАПЫТ