Набор RNAclean

А-1 клеткавага лізісу або гомагенізацыі недастаткова

---- Паменшыць выкарыстанне пробы, павялічыць колькасць буфера для лізісу, павялічыць час гамагенізацыі і часу лізісу.

A-2 Колькасць пробы занадта вялікая

---- Паменшыць колькасць выкарыстанага ўзору або павялічыць колькасць буфера для лізісу.

А-1 Недастатковы лізіс або гамагенізацыя клетак

---- Паменшыць выкарыстанне пробы, павялічыць колькасць буфера для лізісу, павялічыць час гамагенізацыі і часу лізісу.

A-2 Колькасць пробы занадта вялікая

---- Калі ласка, звярніцеся да максімальнай магутнасці апрацоўкі.

А-3 РНК не элюируется цалкам з калонкі

---- Пасля дадання вады без РНКазы пакіньце яе на некалькі хвілін перад цэнтрыфугаваннем.

А-4 Этанол у элюенце

---- Пасля прамывання зноў центрифугируйте і максімальна выдаліце ​​пральны буфер.

Сярэдняе культуральнае асяроддзе А-5 выдалена не цалкам

---- Пры зборы клетак не забудзьцеся максімальна выдаліць пажыўнае асяроддзе.

А-6 Клеткі, якія захоўваюцца ў RNAstore, эфектыўна не цэнтрыфугуюцца

---- шчыльнасць РНК-сховішча больш, чым у сярэднім асяроддзі культуры клетак; таму цэнтрабежную сілу трэба павялічыць. Прапануецца цэнтрыфугаваць пры 3000x g.

A-7 Нізкае ўтрыманне і колькасць РНК у пробе

---- Выкарыстоўвайце станоўчы ўзор, каб вызначыць, ці выкліканы ўзор нізкім ураджаем.

A-1 Матэрыял не свежы

---- Свежыя тканіны трэба неадкладна захоўваць у вадкім азоце або адразу ж пакласці ў рэагент RNAstore для забеспячэння эфекту экстракцыі.

A-2 Колькасць пробы занадта вялікая

---- Паменшыць колькасць узораў.

Заражэнне А-3 РНКазайn

---- Хоць буфер, які ўваходзіць у камплект, не ўтрымлівае РНКазы, у працэсе экстракцыі РНКазу лёгка забрудзіць, і з ёй трэба звяртацца асцярожна.

А-4 Забруджванне электрафарэзам

---- Замяніце буфер электрафарэзу і пераканайцеся, што расходныя матэрыялы і загрузачны буфер не маюць забруджванняў РНКазай.

А-5 Занадта вялікая нагрузка для электрафарэзу

---- Паменшыць колькасць загрузкі пробы, загрузка кожнай лункі не павінна перавышаць 2 мкг.

A-1 Сума пробы занадта вялікая

---- Паменшыць колькасць узораў.

A-2 Некаторыя ўзоры маюць высокае ўтрыманне ДНК і могуць быць апрацаваны ДНКазай.

---- Выканайце апрацоўку ДНКазы без РНКаз да атрыманага раствора РНК, і РНК можна выкарыстоўваць непасрэдна для наступных эксперыментаў пасля апрацоўкі або дадаткова ачысціць з дапамогай набораў для ачысткі РНК.

Для вырабаў са шкла, выпечаных пры 150 ° С на працягу 4 гадзін. Для пластыкавых кантэйнераў апускаюць у 0,5 М NaOH на 10 хвілін, затым старанна прамываюць вадой без РНКазы, а затым стэрылізуюць для поўнага выдалення РНКазы. Рэагенты або растворы, якія выкарыстоўваюцца ў эксперыменце, асабліва вада, павінны быць без РНКазы. Выкарыстоўвайце ваду без РНКазы для ўсіх прэпаратаў з рэагентамі (дадайце ваду ў чыстую шкляную бутэльку, дадайце DEPC да канчатковай канцэнтрацыі 0,1% (V/V), узварушыце на ноч і аўтаклавіруйце).